LyoDt® Reagente di rilevamento PCR in tempo reale per Cronobacter polvere liofilizzata

LyoDt® Reagente di rilevamento PCR in tempo reale per Cronobacter polvere liofilizzata

1.INTRODUZIONE

Cronobacterè un nuovo genere di batteri, il cui predecessore èEnterobacter sakazakii. Cronobacterè un grave patogeno alimentare trasmesso principalmente attraverso la formula per neonati contaminata, che causa meningite neonatale, sepsi e enterocolite necrotizzante.

Questo prodotto è un reagente PCR in tempo reale liofilizzato per il rilevamento diCronobacter. Utilizza il gene ompA altamente conservato diCronobacterSi tratta di un mastermix contenente tutti gli ingredienti necessari, ad eccezione del campione di DNA, e viene pre-distribuito come singolo test in tubi PCR per un uso facile.Questo prodotto non richiede una catena di freddo per il trasporto e lo stoccaggio, che riduce significativamente i costi di spedizione ed elimina eventuali perdite per spreco di reagenti e contaminazione da aerosol.

2. SPECIFICAZIONI E COMPOSIONE

3. immagazzinamento E durata di conservazione

Conservare a temperatura ambiente (5-30°C). Stabile fino a 12 mesi. Una volta aperto il pacchetto sotto vuoto, conservare i prodotti non utilizzati nel sacchetto di plastica sigillabile con i essiccanti.e nel sacchetto di foglio di alluminio.

ATTENZIONE

Il ridimensionamento del pellet di reagente indica che l'umidità si sta infiltrando nel tubo e che il reagente è umido.Tutti i reagenti con pellet significativamente più piccoli del solito devono essere scartati o sottoposti a controllo positivo prima dell'uso.per il controllo dei campioni.

4. EQUIPAMENTI E REAGENTI addizionali richiesti

1) Strumento di PCR in tempo reale

2) Pipette e punte

3) Acqua priva di nucleasi

4) Kit di estrazione dell'acido nucleico

5. SISTEMI di PCR in tempo reale compatibili

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6Esemplari accettabili

Brodo per l'arricchimento alimentare, campioni di vomito, diarrea, ecc.

7. PROCEDURA OPERATIVA

1) Estrazione dell'acido nucleico

Estraggere il DNA dai campioni usando un kit di estrazione appropriato.Si raccomanda diDNAviene eluta con circa 100 μl di tampone di eluzione(TEoH privo di nucleasi₂O) nell'ultima fase diestrazione.L' acido nucleico purificato deve essere utilizzato immediatamente o conservato a -20°C.

2) Preparazione del controllo positivo

Il controllo positivo può essere conservato a temperatura ambiente prima della reidratazione per un massimo di 12 mesi.₂Utilizzare immediatamente o conservare a -20°C.

3) Preparazione del miscuglio PCR in tempo reale

A) Aprire il pacchetto vuoto e estrarre le strisce di 8 tubi contenenti il reagente.Se i tubi forniti non sono compatibili con il vostro strumento, trasferire il pellet del reagente in un tubo ottico compatibile con il suo strumento.

B) Aprire i tubi e scartare il tappo (non adatto alle macchine PCR in tempo reale) e preparare la miscela di reazione sul ghiaccio come indicato di seguito.

passo diestrazione.L' acido nucleico purificato deve essere utilizzato immediatamente o conservato a -20°C.

2) Preparazione del controllo positivo

Il controllo positivo può essere conservato a temperatura ambiente prima della reidratazione per un massimo di 12 mesi.₂Utilizzare immediatamente o conservare a -20°C.

3) Preparazione del miscuglio PCR in tempo reale

A) Aprire il pacchetto vuoto e estrarre le strisce di 8 tubi contenenti il reagente.Se i tubi forniti non sono compatibili con il vostro strumento, trasferire il pellet del reagente in un tubo ottico compatibile con il suo strumento.

B) Aprire i tubi e scartare il tappo (non adatto alle macchine PCR in tempo reale) e preparare la miscela di reazione sul ghiaccio come indicato di seguito.

* Come controllo negativo può essere utilizzata acqua priva di nucleasi.

• Il cappuccio della PCR deve essere utilizzato con tappi (strisce) adatti per la PCR in tempo reale (non fornito).

D) Vorticare i tubi a bassa velocità per 10-15 secondi, centrifugare a 3000 giri al minuto per 20 secondi e inserirli in uno strumento di PCR in tempo reale.

2) Impostazione RT-PCR

Impostare il volume di reazione a 25 μl e la procedura di amplificazione PCR come indicato di seguito.

3) Analisi e interpretazione dei risultati