LyoDt® Real-Time PCR Detection Kit For Salmonella Freeze - Dried Powder

 Kit di rilevamento PCR in tempo reale LyoDt® per Salmonella in polvere liofilizzata

1. INTRODUZIONE

Salmonella è un enterobatterio Gram-negativo e un comune agente patogeno di origine alimentare. Questi batteri sono ampiamente distribuiti in natura e colonizzano frequentemente l'intestino di umani e animali, in particolare pollame, bestiame e animali domestici. I principali veicoli alimentari per la contaminazione da Salmonella includono: carne e prodotti a base di carne, uova e prodotti a base di uova, latte e prodotti lattiero-caseari, ecc.

Questo prodotto è un reagente PCR in tempo reale liofilizzato per la rilevazione di Salmonella. Utilizza il gene invA altamente conservato di Salmonella come bersaglio di rilevamento. È un mastermix contenente tutti gli ingredienti necessari, ad eccezione del DNA modello, ed è pre-dosato come singolo test in provette PCR per un facile utilizzo. Questo prodotto non richiede la catena del freddo per il trasporto e lo stoccaggio, il che riduce significativamente i costi di spedizione ed elimina possibili perdite dovute allo spreco di reagenti e alla contaminazione da aerosol.

2. SPECIFICHE E COMPOSIZIONE

3. STOCCAGGIO E DURATA

Conservare a temperatura ambiente (5-30°C). È stabile fino a 12 mesi. Una volta aperta la confezione sottovuoto, conservare i prodotti inutilizzati nel sacchetto di plastica richiudibile fornito con i disidratanti e nella busta di alluminio.

ATTENZIONE:

La riduzione del pellet di reagente indica l'infiltrazione di umidità nella provetta e l'umidificazione del reagente. Eventuali reagenti con dimensioni del pellet significativamente inferiori al solito devono essere scartati o testati con il controllo positivo prima dell'uso per il test del campione.

4. ATTREZZATURE E REAGENTI AGGIUNTIVI NECESSARI

1) Strumento PCR in tempo reale

2) Pipette e puntali

3) Acqua priva di nucleasi

4) Kit di estrazione degli acidi nucleici

5. SISTEMI PCR IN TEMPO REALE COMPATIBILI

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. CAMPIONI ACCETTABILI

Brodo di arricchimento alimentare, vomito, campioni di diarrea, ecc.

7. PROCEDURA OPERATIVA

1) Estrazione degli acidi nucleici

     Estrarre il DNA dai campioni utilizzando un kit di estrazione appropriato. Si raccomanda che il DNA venga eluito con circa 100μl di tampone di eluizione  (TE o H priva di nucleasi₂O) nell'ultima fase di estrazione. L'acido nucleico purificato deve essere utilizzato immediatamente o conservato a -20°C.

2) Preparazione del controllo positivo

Il controllo positivo può essere conservato a temperatura ambiente prima della reidratazione per un massimo di 12 mesi. Deve essere reidratato prima dell'uso aggiungendo 250 μl di tampone TE o H priva di nucleasi₂O, vortexato a bassa velocità per 15-20 secondi e centrifugato a bassa velocità per 15-20 secondi. Utilizzare immediatamente o conservare a -20°C.

3) Preparazione del mix PCR in tempo reale

A) Aprire la confezione sottovuoto ed estrarre le strisce a 8 provette contenenti il reagente. Verificare che il pellet sia sul fondo della provetta (tagliare il numero di provette necessarie, se necessario). Se le provette fornite non sono compatibili con lo strumento, trasferire il pellet di reagente in una provetta ottica compatibile con lo strumento.

B) Aprire le provette e scartare il/i tappo/i (non adatto per le macchine PCR in tempo reale) e preparare il mix di reazione su ghiaccio come di seguito.

* L'acqua priva di nucleasi può essere utilizzata come controllo negativo.

C) Tappare la PCR utilizzando tappi (strisce) adatti per la PCR in tempo reale (non forniti).

D) Vortexare le provette a bassa velocità per 10~15 secondi e centrifugare a 3000 giri/min per 20 secondi e posizionarle in uno strumento PCR in tempo reale.

2) Impostazione RT-PCR

Impostare il volume di reazione a 25μl e la procedura di amplificazione PCR come di seguito. Raccogliere la fluorescenza FAM a 60°C e selezionare NESSUNO come riferimento passivo.

3) Analisi e interpretazione dei risultati