Kit di test rapido per la sicurezza alimentare per la rilevazione di Escherichia coli enteroemorragico (EHEC) con reagente PCR in tempo reale liofilizzato, senza necessità di catena del freddo

1.Descrizione

Escherichia coli enteroemorragico(EHEC) è un gruppo diE. colii ceppi in grado di causare diarrea emorragica e enterite nell'uomo, il sierotipo O157:H7 essendo il ceppo più rappresentativo.latte crudo, pollame e prodotti derivati, nonché frutta e verdura, con la carne bovina come veicolo primario di trasmissione.

Questo prodotto è un reagente PCR in tempo reale liofilizzatoper il rilevazione diEscherichia coliO157:H7. Si usa il altamente conservato rfbE genetica diEscherichia coliO157:H7 come obiettivo di rilevamento. Si tratta di un mastermix contenente tutti gli ingredienti necessari, ad eccezione del DNA modello, e è pre-distribuito come singolo test in tubi PCR per un uso facile.Questo prodotto non richiede una catena di freddo per il trasporto e lo stoccaggio, che riduce significativamente i costi di spedizione ed elimina eventuali perdite per spreco di reagenti e contaminazione da aerosol.

2. SPECIFICAZIONI E COMPOSIONE

3. immagazzinamento E durata di conservazione

Immagazzinarea temperatura ambiente (5-30°C). Stabile fino a 12 mesi. Una volta aperto il confezionamento sotto vuoto, conservare i prodotti non utilizzati nel sacchetto di plastica sigillabile con i dessicanti,- enel sacchetto di foglio di alluminio. 

ATTENZIONE 

Il ridimensionamento del pellet del reagente indica che l'umidità si sta infiltrando nel tubo e che il reagente è umido.Tutti i reagenti con pellet significativamente più piccoli del solito devono essere scartati o sottoposti a controllo positivo prima dell'uso. per il controllo dei campioni.

4. EQUIPAMENTI E REAGENTI addizionali richiesti

1)Strumento di PCR in tempo reale

2)PipCodicie mance

3)Nucleasi-acqua libera

4)Kit di estrazione dell'acido nucleico

5. SISTEMI di PCR in tempo reale compatibili

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6Esemplari accettabili

Brodo per l'arricchimento alimentare, campioni di vomito, diarrea, ecc.

7. PROCEDURA OPERATIVA

1)NucleareACIDExtrazione

EstrattoDNAda campioni utilizzando un kit di estrazione adeguato.Si raccomanda diDNAviene eluta con circa 100 μl di tampone di eluzione(TE oH privo di nucleasi₂O)nella fase finale diestrazione.L' acido nucleico purificato deve essere utilizzato immediatamente o conservato a -20°C.

2)Preparazione del controllo positivo

Il controllo positivo può essere conservato a temperatura ambiente prima della reidratazione fino a 12 mesi.È...deve essere reidratato prima dell' usoaggiungendo250μldi TE buffer o nsenza ecleasiH₂Oh,utilizzare immediatamente o conservarea -20°C.

3)PCR in tempo realeMIXPriparazione

A) Aprire il pacchetto sottovuoto e estrarre la striscia di 8 tubisControllare che il pellet sia sul fondo del tubo (Tagliare il numero di tubi come necessario seNecessario)Se i tubi forniti non sono compatibili con lo strumento, trasferire il pellet del reagente in un tubo ottico compatibile con lo strumento.

B) Aprire i tubi e scartare il tappo (non adatto alle macchine PCR in tempo reale) e preparare la miscela di reazione sul ghiaccio come indicato di seguito.

* Come controllo negativo può essere utilizzata acqua priva di nucleasi.

C)La PCR deve essere sottoposta a un tappo mediante tappi (strips) adatti alla PCR in tempo reale.(non fornito).

D) Vorticare i tubi a bassa velocità per 10-15 secondi, centrifugare a 3000 giri al minuto per 20 secondi e inserirli in uno strumento di PCR in tempo reale.

4)Impostazione RT-PCR

Impostare il volume di reazione a 25μl e la procedura di amplificazione PCR come indicato di seguito. fluorescenza a 60°C e selezionare NONE come riferimento passivo.

5)RisultatoAanalisi- eIo...Interpretazione