LyoDt® Reagente di rilevamento PCR in tempo reale per il Vibrio cholerae O1/O139 essiccato a congelamento - Non è richiesta una catena a freddo e è pre-distribuito un singolo test

LyoDt^®Reagente per la PCR in tempo reale liofilizzato per Vibrio cholerae O1/O139

Uso’Manuale

1. DESCRIZIONE

Vibrio cholerae è un batterio Gram-negativo che causa il colera, una malattia infettiva intestinale acuta caratterizzata da rapida insorgenza, elevata trasmissibilità e significativa mortalità. In quanto malattia soggetta a quarantena ai sensi del Regolamento Sanitario Internazionale, comprende principalmente i sierogruppi O1 e O139. 

Questo prodotto è un reagente per PCR in tempo reale liofilizzato per la rilevazione di Vibrio cholerae O1/O139. Utilizza il gene altamente conservato rfb di Vibrio cholerae O1/O139 come bersaglio di rilevamento. È un mastermix contenente tutti gli ingredienti necessari, ad eccezione del DNA modello, ed è pre-dispensato come singolo test in provette PCR per un facile utilizzo. Questo prodotto non richiede la catena del freddo per il trasporto e lo stoccaggio, il che riduce significativamente i costi di spedizione ed elimina possibili perdite dovute allo spreco di reagenti e alla contaminazione da aerosol.

2. SPECIFICHE E COMPOSIZIONE

3. CONSERVAZIONE E SCADENZA

Conservare a temperatura ambiente (5-30°C). È stabile fino a 12 mesi. Una volta aperta la confezione sottovuoto, conservare i prodotti inutilizzati nel sacchetto di plastica richiudibile fornito con i disidratanti, e nel sacchetto di alluminio. 

ATTENZIONE: 

Il restringimento del pellet del reagente è un'indicazione dell'infiltrazione di umidità nella provetta e il reagente è inumidito. Eventuali reagenti con dimensioni del pellet significativamente inferiori al solito devono essere scartati o testati con il controllo positivo prima dell'uso per il test del campione.   

4. ATTREZZATURE E REAGENTI AGGIUNTIVI NECESSARI

1) Strumento per PCR in tempo reale

2) Pipette e puntali

3) Acqua priva di-nucleasi

4) Kit di estrazione degli acidi nucleici

5. SISTEMI PCR IN TEMPO REALE COMPATIBILI

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. CAMPIONI ACCETTABILI

Brodo di arricchimento alimentare, ecc.

7. PROCEDURA OPERATIVA

1) Nucleico Acido Estrazione

Estrarre DNA dai campioni utilizzando un kit di estrazione appropriato. Si raccomanda che il DNA venga eluito con circa 100μl di tampone di eluizione (TE o H priva di nucleasi₂O) nella fase finale di estrazione. L'acido nucleico purificato deve essere utilizzato immediatamente o conservato a -20°C.

2) Preparazione del controllo positivo

Il controllo positivo può essere conservato a temperatura ambiente prima della reidratazione fino a 12 mesi. Deve essere reidratato prima dell'uso aggiungendo 250 μl di tampone TE o nucleasi-free H₂O, vortexato a bassa velocità per 15-20 secondi e centrifugato a bassa velocità per 15-20 secondi. Utilizzare immediatamente o conservare a -20°C.

3) PCR in tempo reale Mix Preparazione

A) Aprire la confezione sottovuoto ed estrarre la striscia a 8 provettes contenente il reagente. Verificare che il pellet sia sul fondo della provetta (Tagliare il numero di provette necessarie se necessario). Se le provette fornite non sono compatibili con lo strumento, trasferire il pellet del reagente in una provetta ottica compatibile con lo strumento.

B) Aprire le provette e scartare il/i tappo/i (non adatto/i per le macchine PCR in tempo reale) e preparare il mix di reazione su ghiaccio come di seguito.

* L'acqua priva di nucleasi può essere utilizzata come controllo negativo.

C) Tappare la PCR utilizzando tappi (strisce) adatti per la PCR in tempo reale(non forniti).

D) Vortexare le provette a bassa velocità per 10~15 secondi e centrifugare a 3000 giri/min per 20 secondi e posizionarle in uno strumento per PCR in tempo reale.

4) Configurazione RT-PCR

Impostare il volume di reazione a 25μl e la procedura di amplificazione PCR come di seguito. Raccogliere la fluorescenza FAM (per O1), JOE (per O139)  a 60°C e selezionare NESSUNO come riferimento passivo.

5) Risultato Analisi e Interpretazione